纯氟油Fluo-Oil 135(氟油（yóu）3M Novec HFE7500电子氟化液的替代品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是（shì）一种（zhǒng）纯氟化油，可用于替（tì）换氟油3M Novec HFE7500电子氟化（huà）液（yè）。 Fluo-Oil 135氟油（yóu）的化学和物理化学性质（zhì）与3M Novec HFE7500 相似，如（rú）下表所示（shì）:

优势

生物相容性、可（kě）重复性和稳定（dìng）性。

如何使（shǐ）用？

氟油Fluo-Oil 135用于（yú）稀释FluoSurf Neat表面活性（xìng）剂或已经用Fluo-Oil 135油稀释的表面活性剂。

（由于FluoSurf Neat表（biǎo）面（miàn）活性剂（jì）是一种PFPE-PEG结构的复杂（zá）高（gāo）效纯（chún）表（biǎo）面活（huó）性剂，因为类似于PFPE-PEG结构（gòu）的纯表面活性（xìng）剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段或（huò）三（sān）嵌段表面活（huó）性剂，Surf 含氟表面活性剂等，基本上（shàng）都可以使用纯氟油Fluo-Oil 135进行（háng）稀释。稀（xī）释的（de）浓度从0.2%到12%之间。）

保（bǎo）存

室温下避光保存

安全注意事项

● 避免吸入（rù）、摄入和（hé）接触皮肤和眼睛

● 穿戴耐化学（xué）腐蚀的个人防护装备

● 戴上（shàng）合适的（de）手套

● 穿合适的防护服

● 戴侧护罩的（de）安（ān）全（quán）眼镜

与3M HFE7500油产生液滴性能（néng）的测试比（bǐ）较

分别用（yòng）3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化（huà）油稀释FluoSurf neat表面活性剂，得到4w/w%的（de）质量浓度。

水滴（dī）产生（shēng）或油包水液（yè）滴（dī）产生的两相（xiàng）流速：

油相流速为300μL/hr，水相（xiàng）流速为100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧（yíng）光素的PBS溶（róng）液（用于测试液滴的泄露（lù））

倒置显微镜观察和Image J软件（jiàn）分析。

一、液滴尺寸及（jí）其分布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生相似尺（chǐ）寸的水滴。在既定流速参（cān）数下，液滴的平均直（zhí）径（jìng）为110μm。液滴（dī）尺寸的（de）CV分别为（wéi）2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴（dī）稳定性

大多（duō）数研究团队使（shǐ）用液滴微流体进行细胞（bāo）封装或 PCR 应用。 因此，需（xū）要通过 PCR 的加热（rè）循环以及在（zài） 37°C 下长期孵育（yù）来产生稳定的液滴。 表面活性剂（jì）的选择至关重要，但（dàn）选择油同样重要，以（yǐ）确（què）保可重复的实验以及（jí）单分散液滴群的（de）生成和保（bǎo）存。

分（fèn）别从三个方面测试液滴的（de）稳定性：一是把（bǎ）液滴重（chóng）新（xīn）注入到玻（bō）璃观察腔室内；二（èr）是（shì）经典的（de）PCR热循环过程，循环过（guò）程30次（cì），每次（cì）热循环（huán）为98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置于37℃的培养箱内放置3天（tiān）。对1万个液滴进行分析。

无（wú）论是在 Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中（zhōng）形成（chéng） FluoSurf™ 稳定的液滴，在 PCR 加（jiā）热循环后或在 37°C 孵育 3 天后，液（yè）滴平均尺寸在（zài）生成时保（bǎo）持（chí）不（bú）变 [约（yuē） 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴种群仍然是单（dān）分散的（de）。 根据统计分析，计算出在加（jiā）热循环后，只有 5% 的整体液滴的大小与平均初始液滴直径的差异超过 10%。

将（jiāng）氟化油从 Novec™ HFE 7500 切（qiē）换到 Fluo-Oil™ 135 对液滴稳定性没有影响。

三、液滴内的（de）分子（zǐ）滞（zhì）留

基于（yú）液（yè）滴的化学或生化分（fèn）析依赖于试剂在单个液滴（dī）中保持隔离。 泄漏到连续相（xiàng）和液滴（dī）之（zhī）间的交换（huàn），即使很低，也会影（yǐng）响结果的完（wán）整性，因（yīn）此，分子保（bǎo）留（liú）是选择氟化油时要考虑（lǜ）的重（chóng）要参（cān）数。 众所周知，氟化油（yóu）会限制液（yè）滴之间（jiān）的分（fèn）子（zǐ）交换（huàn），因此应验（yàn）证（zhèng）切换油的影响（xiǎng）。

同时生成两种油包水乳液[“空”（负载 PBS）和（hé）“满”（负（fù）载荧光素）液（yè）滴]，一（yī）次使用 Novec™ HFE7500，然后使用（yòng） Fluo-Oil™ 135 作为连续（xù）相。 两种（zhǒng）混合物，每一种都包含两个（gè）种群，在 37°C 下孵育，并在不（bú）同的时间点拍摄照片。 使（shǐ）用（yòng） ImageJ 软件对液（yè）滴内荧光（guāng）强度的演变进行（háng）了统计定量分析（xī）。

上图显示了两个群体（tǐ）之（zhī）间平均荧光强度差异的演变（染料加载和空液滴）以（yǐ）及在初始时（shí）间点和 48 小（xiǎo）时后相关（guān）的荧光和明场（chǎng）图（tú）片。

在 24 小（xiǎo）时的过程中，两种氟化（huà）油产生的液滴中荧光素（sù）的泄漏率相似（sì）（约 15% 泄（xiè）漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生液滴（dī）的情况下保持恒定 3 天。相反，在 24 小时（shí）后， Novec™ HFE7500 中（zhōng）液滴的泄漏继续减少（shǎo）并达到 30% 左右（yòu）。 这种（zhǒng）较（jiào）长孵育时间的较差保留性能可（kě）归因于后一种油的粘度略（luè）低，加速了液滴（dī）之间更快（kuài）的分子（zǐ）交换（huàn）。

结论

对于基于液滴（dī）的（de）微（wēi）流体应用，从一种氟化油（yóu）类型（xíng）切换到另一种（zhǒng）类型可能会（huì）对微流体实验的过程产生重大影响，尤其是对液滴的有效（xiào）生成产（chǎn）生重大（dà）影响。 在氟油3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和 氟油（yóu）Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实更换这两种氟化油对（duì）实验（yàn）条件和结果没有影响。 当使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相时，甚至可以观察到荧光素（sù）在液滴内（nèi）的更（gèng）好保（bǎo）留。

氟化油（yóu）Fluo-Oil™ 135 是用于液（yè）滴（dī）微流体应（yīng）用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟（fú）油 的有效（xiào）替代品。